El análisis biológico de la terapia génica es la evaluación científica de los productos de terapia génica en términos de farmacocinética, farmacodinamia, inmunogenicidad, seguridad y otros aspectos in vivo. Los productos de terapia génica son un nuevo tipo de fármacos que utilizan genes exógenos o técnicas de edición genética para tratar enfermedades genéticas o adquiridas, con las características de alta especificidad, larga duración y eficacia potencial. Actualmente, los productos de terapia génica incluyen principalmente ADN desnudo, ARN, transferencia de genes mediada por vectores-y edición de genes.
La transferencia de genes mediada por vectores-es el uso de vectores virales o no-virales para administrar el gen objetivo en las células objetivo, haciendo que se exprese o se integre en el genoma del huésped en las células. La transferencia genética mediada por vectores-es el método de terapia génica más utilizado y uno de los métodos más prometedores para aplicaciones clínicas. Entre ellos, el vector de virus adeno-asociado (AAV) es un virus defectuoso de ADN monocatenario- sin envoltura, con las ventajas de alta seguridad, baja inmunogenicidad, amplio rango de huéspedes y expresión estable. Se considera uno de los vectores de terapia génica más ideales.
La estrategia bioanalítica para los fármacos de terapia génica basados en AAV- debe formularse de acuerdo con su mecanismo y sus características especiales. En términos generales, es necesario considerar los siguientes aspectos:
- Exposición al fármaco: la concentración o número de copias del vector AAV y el gen diana en sangre u otras muestras biológicas, que refleja la distribución y eliminación del fármaco in vivo. Por lo general, para la detección se utiliza el método de PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR).
- Biodistribución: la distribución del vector AAV y el gen diana en diferentes tejidos y órganos, lo que refleja la dirección y la especificidad tisular del fármaco in vivo. Por lo general, para la detección se utiliza qPCR o el método de hibridación in situ (ISH).
- Persistencia y eliminación: el tiempo de supervivencia y la vía de eliminación del vector AAV y el gen diana in vivo, lo que refleja la estabilidad y el metabolismo del fármaco in vivo. Por lo general, se utiliza el método qPCR o ISH para la detección.
- Eliminación viral: la posibilidad de que el vector AAV se excrete o secrete fuera del cuerpo a través de excrementos o secreciones, lo que refleja el riesgo potencial del fármaco para el medio ambiente y otros. Por lo general, se utiliza qPCR o un método de ensayo infeccioso para la detección..
- Inmunogenicidad: la posibilidad de que el vector AAV y el gen diana provoquen una respuesta inmunitaria en el cuerpo, lo que refleja el impacto del fármaco en el sistema inmunológico del cuerpo. Por lo general, se utiliza el método ELISA o electroquimioluminiscencia (ECL) para detectar anticuerpos anti-AAV o anticuerpos anti-proteína diana, y ELISPOT o método de citometría de flujo para detectar la respuesta inmunitaria celular.
- Toxicidad inmunitaria: la posibilidad de que el vector AAV y el gen diana causen reacciones adversas-inmunitarias en el organismo, lo que refleja el impacto del fármaco en la seguridad del organismo. Por lo general, el método Bio-Plex o ECL se utiliza para detectar citocinas o factores inflamatorios, y se utilizan métodos hematológicos o bioquímicos para detectar la función sanguínea o hepática.
